抗體的結構分為重鏈與輕鏈，其中輕鏈可能是kappa形式或lambda形式，不同的B細胞所衍生出的漿細胞可能表達不同的輕鏈，但由同一B細胞所衍生出的漿細胞只會表達固定的一種輕鏈。因此，正常人體內的kappa輕鏈與lambda輕鏈會有一個大致固定的比例，但如果有B細胞或漿細胞癌化，由於其均來自於單一的病變細胞，因此這些細胞都會是表達固定一種輕鏈(亦即light chain restriction)，使得體內的兩種輕鏈比例偏移。因此對於這種偏移的檢測可以作為一種診斷測試。在現行的檢測方式中，流式細胞儀需要新鮮的樣本並且看不到組織型態; 分子檢測需要較長時間並且也看不到組織型態; 以IHC染色偵測組織蛋白則會有高雜訊的問題。另外，目前以ISH來偵測輕鏈的mRNA只能檢測分化至後期的B細胞與漿細胞，分化早期的B細胞由於輕鏈表達量低因此難以偵測。Ventana medical systems, inc.所使用的雙色CISH在過程中會將訊號進行兩次放大以偵測較低表達的細胞，並且可以在單一一張組織切片中以雙色顯示兩種輕鏈以進行評估(1)。
在一項回溯性研究中，分別從Stanford University收集了19個有流式細胞儀結果的案例，從Cleaveland Clinic收集了18個有流式細胞儀結果的案例，從University of Arizona收集了27個流式細胞儀結果的案例，以及從University College of London收集了15個有IHC結果的案例。上述案例均為成熟B細胞之非何杰金氏淋巴瘤，並且有組織包埋蠟塊。上述各機構進行流式細胞儀為採用各自的臨床實驗室標準程序，而沒有對這個研究標準化。使用自動化儀器進行CISH的結果，由3位病理科醫師進行評估，評估時評估者不知道該案例流式細胞儀或IHC的結果，也不知道彼此的評估結果。如果不同評估者的意見分歧，則透過聯合的顯微鏡審閱來達成共識。在達成共識之後，試驗結果才進行解盲並且與流式細胞儀或IHC的結果對比。由於在研究當時雙色CISH屬於新技術，因此需要將各種結果進行定義: 陽性結果定義為部份或全環的細胞質染色(無論是kappa和/或lambda輕鏈); 核染色則視為非特異性(由於切片保留了組織型態因此可以辨別); 不確定的中間結果(intermediate)則是表示當看見惡性B細胞質沒有染色但是同片的漿細胞有染色(表示染色成功)或是同片沒有漿細胞; 失敗染色則表示當看見惡性B細胞質沒有染色並且同片有漿細胞但也沒有染色。研究一共收錄了79個案例，其中70例有產生陽性結果，9例產生不確定的中間結果(其中4例同片沒有漿細胞)。70例有產生陽性結果的案例中，69例與流式細胞儀或IHC的結果一致(98.6%)，不一致的那一例則屬於濾泡性淋巴瘤(follicular lymphoma, FL)，佔70例中屬於FL的28例的3.6%(1)。
VENTANA Kappa and Lambda Dual ISH mRNA Probe Cocktail於12/05/2024通過De Novo途徑獲得上市許可，並成立新的分類分級21 CFR 864.1861 Hematolymphoid neoplasm immunoglobulin mRNA in situ hybridization detection device以及Product Code SDP，其鑑別為”用於血液淋巴腫瘤之輔助診斷，並且結果不作為單獨診斷依據之體外檢測。” (2)。
參考資料
- L. M. Rimsza, W. A. Day, S. McGinn, A. Pedata, Y. Natkunam, R. Warnke, J. R. Cook, T. Marafioti, T. M. Grogan, Kappa and lambda light chain mRNA in situ hybridization compared to flow cytometry and immunohistochemistry in B cell lymphomas. Diagnostic Pathology. 9, 144 (2014).
- Inc. Ventana Medical Systems, “VENTANA kappa and lambda dual ISH mRNA probe cocktail assay” (DEN240025, FDA, 2024), (available at https://www.accessdata.fda.gov/cdrh_docs/pdf24/DEN240025.pdf).